引物#探针

重组酶聚合酶扩增（ ，RPA），被称为是可以替代PCR的核酸检测技术（由英国公司开发）。以此为基础的核酸扩增产品，能够在15分钟内进行常温下的单分子核酸检测。该技术对硬件设备的要求很低，特别适合用于体外诊断、兽医、食品安全、生物安全、农业等领域。 酶促重组等温扩增（ ，ERA），由苏州先达基因科技有限公司独立自主开发，拥有全球自主知识产权，在低温条件下(25-42℃)可对痕量的靶DNA片段进行特异性的扩增，在最适温度35-40℃时，扩增反应时间仅需15分钟，以此达到核酸快速检测的目的。该技术同样对硬件设备的要求很低，现已应用于研究诊断、公共卫生、食品安全、水产畜牧等各个领域。 RPA和ERA的扩增引物可以说是整个反应的关键所在，那么怎样才能设计好其引物呢？ 1、RPA引物需要多长？ RPA引物一般在32至35个核苷酸之间。某些情况可能用到少于30个核苷酸的引物，但扩增过程会显著减缓。 ERA 引物需要多长？ 为了充分利用 ERA 的检测速度和灵敏度，我们建议客户使用 29-32 个核苷酸长 度的引物。通常情况下，PCR 引物可用于 ERA 反应体系，但这类引物的检测速 度和灵敏度可能不及较长的引物。 2、RPA引物应当相距多远？ 这取决于你的具体应用。标准试剂盒适用于不超过500bp的扩增产物。RPA扩增产物的大小是没有下限的，不过RPA引物一般需要扩增子超过80bp。扩增产物在100-200bp之间，可以实现最快的RPA扩增。 ERA 引物应当相距多远？ 一般而言，我们建议两个 ERA 引物产生的扩增片段不应超过 300bp。ERA扩增片段的大小或许没有下限，不过根据 ERA 引物最小长度，扩增片段的大小最小 约 80bp。为了获得最快的检测速度，最终的扩增片段长度应为 100-200bp。 3、RPA 我需要筛选多少引物？ 这取决于你对检测灵敏度的要求。举例来说，如果目标分子上千，那么绝大多数引物都够用了。对灵敏度要求很高的话，最好是进行系统性的引物筛选。一开始筛选的时候，候选引物可以有10到20对。测试的引物越多，找到好引物的几率也就越大。 ERA 我需要筛选多少引物？ 这取决于您对检测灵敏度的要求。举例来说，如果您只需要每个反应检测 1000 个分子或以上，那么大多数引物对都够用了。对于极高灵敏度的检测，最好是进 行系统性的引物筛选以找到好的 ERA 引物。最初筛选时，测试的引物条数通常 是正反向引物各 7 条。测试的引物越多，找到能够检测单个分子的好引物对的几率就越大。...